培养基的配制权威发布_培养基配方表大全(2024年11月精准访谈)
如何配制和灭菌培养基:详细步骤指南 슥配制和灭菌是微生物实验中至关重要的步骤。以下是详细的操作方法: 配制溶液 ꊩ斥 ,向容器中加入所需的水量。根据培养基的配方,称取各种原料,依次加入并使其溶解。对于蛋白胨、肉膏等物质,需要加热溶解。蒸发的水分在全部溶解后用水补足。 对于固体培养基,先将已配好的液体培养基煮沸,然后加入称好的琼脂,继续加热至融化,并搅拌以防糊底烧焦。 调节pH 使用pH试纸(或pH计、比色计)测试pH值。如果pH不符合要求,可以用10%的HCl或10%的NaOH调节至配方所需的pH值。 过滤 覻䧺𘣀纱布或棉花过滤已配好的培养基。用纱布过滤时,折叠成六层;用滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。 分装 报𗲨🇦培养基需要进行分装。制作斜面培养基时,分装于试管中;若制作平板培养基或液体、半固体培养基,则分装于锥形瓶内。分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一手握几支试管或锥形瓶,依次接取。分装时,不要让培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管的培养基量视试管和锥形瓶的大小及需要而定。斜面培养基每只15㗱50mm试管约装3-4mL(1/4-1/3高度),深层培养基每只20x220mm的试管约装12-15mL;锥形瓶装入1/2容积。 加棉塞 銥装完毕后,用棉塞堵住管口或瓶口,以过滤空气,避免污染。棉塞用新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时,将棉花铺展适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成塞入管口或瓶口紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。塞好以手提棉塞,管、瓶不下落为宜。棉塞2/3应在管内或瓶内,上端少露。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。 制作斜面和平板培养基 갟穊培养基灭菌后,在未凝固时制作斜面和平板培养基。 制作斜面:在实验台上放1支长0.5-1m、厚1cm左右的木条,将试管头部枕在木条上,使培养基自然倾斜,凝固成斜面培养基。 制作平板:将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,将培养基倒入培养皿中,每皿约10mL铺满皿底后放置15分钟左右,待凝固将5个培养皿一叠,倒置,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基末长杂菌,即可用来培养微生物。 通过以上步骤,你就能成功配制和灭菌培养基,为微生物实验打下基础。
动物细胞培养全攻略:从基础到实践 𑠥觉駻胞培养的基础步骤 获取材料:从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。 剪碎处理:将材料剪碎,并用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理,形成单个细胞。 培养基配制:将处理后的细胞移入培养基中,配成一定浓度的细胞悬浮液。 细胞贴壁:悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上,形成细胞贴壁。 接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到互相接触时,细胞会停止分裂增殖。 传代培养:将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理,再配成新的细胞悬浮液。 젥觉駻胞培养所需的器皿 培养器皿:分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用,而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种: 培养瓶:用于培养及繁殖细胞,置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。 培养皿:用于装取、分离、处理组织,以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。 多孔培养板:用于各种检测实验,如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。 操作器皿:用于实验室中的操作,包括贮液瓶、吸管和加样器。 贮液瓶:用于存放或配制培养用液体,如培养液、血清及试剂等。 吸管:分为刻度吸管和无刻度吸管,前者用于吸取、转移液体,后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。 移液器:又称加样器,用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器,吸量准确、方便,可保证实验样品(或试剂)含量精确,重复性好。 其他用品:包括离心管(收集细胞)、试管(放置试剂)、玻璃容器(存放吸管)、贮槽(存放小件培养物品)、冻存管(冻存细胞),各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 ꠥ觉駻胞培养的实践应用 原代培养:从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。 传代培养:当细胞从动植物中生长迁移出来,形成生长晕并增大后,将其分成若干份,接种到若干份培养基中,使其继续生长、增殖。 通过这些步骤和器皿的使用,可以进行有效的动物细胞培养,为科研和实验提供可靠的细胞来源。
2216E琼脂培养基制备全攻略 2216E琼脂培养基是一种专为海生细菌培养和计数设计的培养基。以下是详细的制备步骤和注意事项: 培养基配方(固体) 蛋白胨:5克 酵母膏:1克 磷酸高铁:0.01克 琼脂:15-20克 陈海水:1000毫升 培养基配制步骤 配料 根据配方换算,在容器中加入少量水(蒸馏水或自来水)。 按照配方称取各种药品,依次加入。 加足所需水量(一药一勺,取药后立即盖上瓶盖)。 溶解 淀粉溶解:少量冷水调成糊状。 加热溶解,特别是含有琼脂的培养基,一定要煮沸。琼脂的熔解温度为95-97℃,需要边加热边搅拌以防止烧焦。 调pH 用煮沸的5%氢氧化钠溶液调节pH至7.6Ɒ.2,25℃。 过滤 用滤纸或棉花进行过滤(有时可以省去)。 分装 一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。 三角瓶 静置培养:100ml培养基/250ml的三角瓶,最多不能超过150ml。 摇瓶培养:15-20ml培养基/250ml的三角瓶,保证通气良好。 试管分装 液体培养基一般装4-5ml,约试管的1/4高度。 固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。 包扎 分装好后,塞上棉塞,再用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。 灭菌 置高压蒸气灭菌器中,在121℃(约105kPa)下灭菌20min。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。 倒平板 将冷至50℃培养基分别倒入经灭菌的各平皿中,每平皿约15mL,待其冷却凝固,置2-8℃冰箱内保存备用。 注意事项 该培养基无机盐成分较多,在高温高压灭菌后容易产生沉淀。为了更好的倒平板,灭菌前的溶解很关键,先加入水,边搅拌边缓慢加入干粉,不要让干粉成团。倒平板之前,应充分摇匀,尽量让沉淀分散开来,避免聚集在一起影响计数。 通过以上步骤,您就可以成功制备2216E琼脂培养基,为海生细菌的培养和计数提供良好的环境。
植物组培室设备与设施全攻略 在现代化的组培工厂中,每天都有数万株组培苗从组培瓶中出瓶,进入自然气候环境进行过渡培养。这个过程对组培苗的成活率有着至关重要的影响,因为自然环境中的温度、光照和湿度等因子会随着昼夜变化而产生大幅度的波动。为了确保组培苗的成活率,组培室的设备配置和设施建设显得尤为重要。 化学实验室 ꊥ学实验室主要用于组培过程中的洗涤、干燥、保存,以及培养基的配制和分装。这里需要进行高压灭菌,处理大型植物材料,并进行生理和生化分析。实验室的要求与一般的化学实验室相同,需要保持整洁和无菌。 接种室(无菌室) 犦姧室是进行无菌接种的地方,室内要求光滑平整,地面无缝,以避免灰尘积累。定期用甲醛或高锰酸钾进行薰蒸消毒灭菌,或者用紫外线灯照射20分钟以上。 培养室 𑊥䩜要保持整洁,配备控温、照明设备及培养架等装置。室内温度要求恒定在25~27℃,或者根据所培养的植物进行调整。光源选择白色荧光灯为佳。 其他设施 튦条件的情况下,可以设立细胞实验室和摄影室,以进行更深入的研究和记录。 仪器设备 슥䩥𒾧ᮥ.1克的药物天平,以及精确度为0.001克和0.0001克的分析天平,用于称取培养基中的各种药品。 烘箱和恒温箱:用于烘干玻璃器具及测定培养物的干重量。 冰箱:用于贮藏各种维生素、激素及培养基母液,保存实验材料及进行低温处理。 酸度测定仪:用于测定培养基的pH。 高压灭菌锅:用于培养基和玻璃器皿等用具的高压灭菌。 其他设备:还应配备显微镜、显微摄影、离心机以及悬浮培养用的转床、摇床等。 玻璃器皿和用具 觚玻璃器皿包括各种类型的试管、三角瓶、培养皿、量筒和烧杯等。常用器具可选用医疗器械或微生物实验所用的各种镊子、剪刀、解剖刀和解剖针等。 通过这些设施和设备的合理配置,可以有效提高组培苗的过渡成活率,进而提升组培工厂的工作效率和经济效益。
植物组培实验室必备设备清单 𑊦䍧駻培实验室需要一些关键设备来支持各种实验操作。以下是一些必不可少的设备: 培养容器 𑊨褺茎尖、花药、幼胚的培养。推荐规格为20mm*150mm、25mm*150mm、0mm*200mm。 三角瓶:适用于各种培养,容积从50毫升到300毫升不等。小瓶口大底,培养面积大,透光性好。 果酱瓶或罐头瓶:用于大量繁殖组培苗,成本低,操作方便,但培养基容易失水,污染率较高。 培养皿:用于无菌材料的分离、发芽、单细胞固体平板培养等,规格有60mm、90mm和120mm。 兰花瓶:主要用于兰科花卉的继代培养。 塑料容器:轻便耐用,适合各种培养需求。 封口材料:用于防止培养基干燥和污染杂菌,可用牛皮纸、硫酸纸、耐高温聚丙烯塑料等。 玻璃器皿 瓶:用于存放各种试剂和母液,有广口和细口之分,棕色瓶用于见光易分解的药品。 烧杯:用于配置各种母液和培养基。 量筒:用于测量各种溶液及培养基的配制。 容量瓶:用于配制各种溶液时定容。 移液管(吸管):用于吸取各种母液和植物生长调节剂,有条件的可用微量可调移液器。 接种器械 ꊩ子:有直镊和枪镊之分,接种和转移材料常用枪镊,规格有16cm、20cm、23cm、26cm、30cm。 剪刀:有直剪和弯剪之分,用于剪取植物材料、茎段,进行继代培养的转接。 解剖刀:用于切割植物材料。 其他工具:包括接种针、接种铲等,用来接种花药或转移植物组织。 这些设备是植物组培实验室的基础设施,确保实验的顺利进行。
植物组织培养常见问题及解决方法 植物组织培养过程中,污染问题是一个常见的挑战。以下是一些实用的建议,帮助你有效处理这些污染问题。 培养基的配制 ꊥ覤物组织培养中,MS培养基是最常用的,它包含多种化合物。这些化合物在混合时可能会发生化学反应,导致沉淀和营养成分的改变。因此,配制MS培养基时,需要先配制多种高倍母液,并确保每种成分都完全溶解后再加入另一种。推荐使用Coolaber的MS培养基基盐(PM1011),这样可以更经济高效地配制培养基。 灭菌后培养基不凝胶或凝胶偏软 植物凝胶和琼脂对酸性条件敏感,pH值低于5时很难成胶或凝胶偏软。因此,高压灭菌前需要调节培养基的pH值至5.5-6.0。此外,植物凝胶对二价阳离子的浓度有要求,所以在1/2MS培养基中需要适当增加植物凝胶的用量。灭菌后,倒出培养基前一定要摇匀,因为琼脂密度大,底层含量高,容易导致培养基强度不均匀。选择Coolaber改良的MS培养基(PM10121,pH5.8Ɒ.2),含蔗糖和琼脂/植物凝胶,可以省去调pH的步骤。 水解酪蛋白的选择 水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分,两者在使用过程中无明显区别。酶水解更有利于发挥其作用,通常用量在500mg/L。 植物激素的溶解 AA、IBA、GA、玉米素、多效唑等植物激素应先溶解于少量95%的乙醇中,再加水定容配制成母液。如有结晶析出,可考虑用1/10体积的乙醇溶解后再定容。2,4-D易溶于碱性水溶液,可用少量1mol/L的NaOH溶液溶解后再慢慢加水定容。KT和6-BA先用少量的HCL溶解,再加水定容到一定的浓度。 细胞分裂素的使用浓度 𑊧𛆨分裂素在培养基中的使用浓度通常为0.1~10.0mg/L,多数用1.0~2.0mg/L。KT的浓度为0.5~2mg/L。具体浓度需根据实验材料进行调整。细胞分裂素可以单独使用,也可以与细胞生长素配合使用。 通过以上方法,可以有效处理植物组织培养过程中的污染问题,提高实验成功率。
茶树菇种植与食用全攻略:32种方法详解 🠨𖦠菇的种植与栽培方法多种多样,以下是32种不同的种植工艺,助你轻松掌握茶树菇的种植技巧: 茶树菇清鸡汤及其制备方法 𒊥駔覝鲍菇菌渣栽培茶树菇的方法 𑊨𖦠菇多糖及其应用 𖦠菇微波真空干燥方法 制备抗氧化活性茶树菇子实体多糖的方法 茶树菇菌株及制备方法 𑊨𖦠菇培养方法 𖦠菇炖乌鸡的制作方法 茶树菇发酵保健饮料及其制备方法 䊨𖦠菇的培育方法 𑊦🨌𖦠菇老鸭汤的制备方法 𒊨𖦠菇营养基配制法 𖦠菇培养基及其制备方法 𑊨𖦠菇培养基及其配置方法 𖦠菇栽培料配伍及制作方法 𑊩㎥𖦠菇酱的加工方法 𖦠菇种植用板栗脯基质料及其制作方法 𐊥짬茶树菇酱及其制备方法 𒊦洨𖦠菇饮料及其制备方法 䊨𖦠菇种植培养料及其使用方法 𑊨𖦠菇的工厂化栽培方法 튨𖦠菇牛肉酱的制作方法 茶树菇培养基及其配制方法 𑊥駔覗 粉碎茶籽壳栽培茶树菇的方法 𑊨𖦠菇生产方法 𑊥𖥤具有免疫增强活性茶树菇胞外粗多糖的方法 深层液体发酵法制备富硒茶树菇粗多糖粉的方法 𑊧㨌𖦠菇保健饮料的制作方法 䊥駔褺𝥑襹𝥟𖦠菇的方法 튧𝦜言𖦠菇出菇后菌袋废料重新制作白木耳茶树菇的方法 𑊥茶树菇的生产方法 𖦠菇工厂化栽培方法 튊通过这些方法,你可以轻松种植和食用茶树菇,享受其带来的美味和营养价值。快来试试吧!
细胞培养污染常见问题及解决方案 在细胞培养过程中,污染是一个常见且令人头疼的问题。为了避免这些“雷区”,确保实验的顺利进行,我们总结了一些常见的污染源和解决方案。以下是一些需要注意的关键点: ❀ 雷区一:解冻操作不当 忽视无菌操作,导致细胞污染㗊在进行细胞解冻时,冻存管的盖子下边缘应位于水浴锅页面上方,避免其接触水面。此外,定期清洁水浴锅,并使用无菌水。推荐使用专用的支原体祛除试剂,如Water Shield,来确保水浴锅的无菌环境。 ❀ 雷区二:培养基配制不当 忽视无菌操作,导致培养基被污染㗊在整个细胞培养过程中,都应注意无菌操作。在配制培养基后,建议先抽取少许放入培养瓶或培养皿内,在37℃培养箱内放置24~48小时,检测培养液是否有污染。选择高品质的胎牛血清也非常重要,如Ausbian进口特级胎牛血清,内毒素含量≤3EU/ml,各项微生物均为未检出,既保证了实验安全,又可以在一定程度上确保实验结果的稳定。 ❀ 雷区三:实验室卫生维护不足 实验垃圾不及时清理,实验环境不及时清洁㗊实验室的清洁和维护对于防止污染至关重要。定期清洁超净台操作台面、细胞实验室台面、培养箱、冰箱、水浴锅、离心机、显微镜等实验设备及仪器。使用专用的支原体祛除喷雾剂,如Mycoplasma-off,可以在几分钟内迅速杀除支原体、真菌、细菌等微生物。 通过注意这些细节,可以有效避免细胞培养过程中的污染问题,确保实验的顺利进行。
细胞培养那些事儿:心累到想哭的时刻 细胞培养这事儿,真的是让人又爱又恨。你永远不知道下一秒会遇到什么问题:细胞不长了、不贴壁了、悬浮细胞成簇……简直是让人操碎了心。 培养细胞不贴壁 可能原因: 胰蛋白酶消化过度:这个锅你得背,消化时间太长或者浓度太高都会让细胞受不了。 支原体污染:这个可是个大问题,得赶紧分离培养物,检测支原体,清洁支架或者培养箱。如果发现支原体,果断丢弃培养物。 培养基pH值过碱:NaHCO3分解了?用无菌醋酸溶液调整pH值,或者充入无菌CO2。 细胞老化:细胞也有寿命,用新的保种细胞试试吧。 接种细胞起始浓度太低或太高:调整一下浓度,找到最佳接种点。 解决方法: 缩短胰蛋白酶消化时间或降低浓度。 分离培养物,检测支原体,清洁支架或培养箱。 用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2。 启用新的保种细胞。 调节最佳接种细胞浓度。 悬浮细胞成簇 可能原因: 培养液中含钙、镁离子:用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞,轻巧吹吸。 支原体污染:分离培养物,检测支原体。 蛋白酶过度消化:这个得小心,蛋白酶过度会让细胞裂解。 DNA污染:用DNasel处理细胞。 培养细胞生长缓慢 䊥糖𝥎因: 更换不同培养液或血清:比较新培养液与原培养液成分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验,让细胞逐渐适应新培养液。 培养液中一些细胞生长必须成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏:换入新鲜配置培养液,或补加谷氨酰胺及生长因子。 培养物中有少量细菌或真菌污染:用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物。 试剂保存不当:血清需保存在-10到-20℃,培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存,需在1周内用完。 接种细胞起始浓度太低:增加接种细胞起始浓度。 细胞已老化:换用新的保种细胞。 支原体污染:分离培养物,检测支原体,清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。 培养细胞生长不好 可能原因: 细胞本身的状态:传代次数多,细胞老化;接种量过低,细胞生长缓慢;传代时间过晚,细胞中毒;胰酶消化时间过长或过短;细胞的冻存与复苏:慢冻速溶。 污染:支原体污染、霉菌污染。 培养基或血清:更换血清或培养基之前未进行验证;选择的培养基是否合适;培养基配制是否合适;培养基配制是否准确无误。 细胞培养真的是一场耐力赛,每一步都得小心翼翼。希望这些小贴士能帮到你,让你的实验顺利一点,心累少一点。加油!ꀀ
酵母培养基全解析:从基础到高级 𑠙PD和YPDA培养基属于完全培养基,能够提供酵母菌生长所需的所有营养。YPDA培养基在YPD基础上添加了硫酸腺嘌呤,防止含有ADE1和ADE2突变等位基因的酵母菌株在长期培养后变色。 𐠙PD Agar和YPDA Agar分别在YPD和YPDA基础上加入了Agar,用于倒板培养。 🠓D系列培养基称为不完全培养基,Minimal SD Base由硫酸铵、微量元素和葡萄糖按比例混合而成,提供野生型酵母菌生存所需的基本物质,但不包含突变菌株必需的氨基酸。将缺陷型氨基酸混合物添加到Minimal SD Base中,可以配制成筛选培养基,用于选择含有特异载体的酵母或进行杂交筛选。 ꠄO Supplement是缺陷型氨基酸混合物,包含核苷酸,用于酵母双杂交和单杂交筛选营养缺陷型表型的酵母转化株,以及含有特异载体酿酒酵母的批量培养。 𑠓D+缺陷型氨基酸混合物是由Minimal SD Base与缺陷型氨基酸混合物混合而成的筛选培养基,如SD/-Leu Broth和SD/-Trp Broth,分别用于筛选bait和prey载体。携带这两个载体的酵母细胞可以在双缺筛选培养基SD/-Leu/-Trp上生长,而不含有这两个基因的亲代酵母菌株不能生长。 🠓C培养基是不含葡萄糖等碳源的Minimal SD Base,即不含碳源和氨基酸的酵母氮源培养基。如果需要碳源,需单独过滤除菌后再加入灭菌后的SC+缺陷型氨基酸混合物中。
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